pMF-vectoren voor merkervrije technologie
Plant Research International, Wageningen, heeft een nieuwe, geoptimaliseerde plantentransformatie-vector, pMF, gemaakt voor het produceren van genetisch gemodificeerde planten die vrij zijn van ongewenste DNA-sequenties.
Meer informatie in het engels:
|
GM aardbeischeuten na transformatie met pRCNG (modelvector, Schaart et al. 2004).
Links: GM scheut vóór Dex-behandeling; rechts: GM scheut na merker-excisie |
Gebruik van de pMF-vectoren voor plantentransformatie maakt effectieve verwijdering mogelijk van ongewenste DNA-sequenties, zoals antibiotica resistentie-genen, uit het verkregen transgene plantmateriaal. Verwijdering van selecteerbare merkergenen kan gewenst zijn voor een betere consumentenacceptatie van genetisch gemodificeerde gewassen. Bovendien maakt merkerverwijdering stapeling van transgenen mogelijk door secundaire transformaties
Principe
De pMF-vector is uitgerust met een induceerbaar plaats-specifiek recombinatiesysteem voor de verwijdering van ongewenste DNA-sequenties. Een negatieve selectiestap gebruik makend van het cod A (cytosine deaminase) gen zorgt voor de uiteindelijke productie van volledig merkervrije planten (ref. Schaart et al. (2004) Plant Biotechnology J. 2: 223-240). Cod A is een conditioneel letaal dominant gen dat codeert voor een enzym dat niet-giftig 5-fluorocytosine (5-FC) omzet in cytotoxisch 5-fluorouracil (5-FU).
|
Transformatie met gebruik van positieve selectie, bv. op kanamycine (nptII)
Verwijdering van selectiemerker door chemische inductie van Recombinase R activiteit
Selectie op merkervrije planten door gebruik van negatieve selectie (codA) op 5-FC
|
Figuur 1. Selectieschema voor de productie van merkervrije transgene planten met gebruikmaking van pMF1. Een soortgelijk selectieschema kan worden gevolgd voor het gebruik van pMF2- of pMF3- vectoren als de voorkeur wordt gegeven aan positieve selectie op, respectievelijk, hygromycine of fosfinothricine.
Patenten
Een patentaanvraag voor ons merkervrije systeem loopt (US2004185567/EP1264891/WO02097102). Toegekend in NZ.
Het Recombinase-LBD deel valt onder patent EP0632054, vervallen in SE, PT, DK, MC, LU, GR en NL.